白蜡植物组织培养的技术操作

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白蜡植物组织培养的技术操作

　　白蜡培养基的成分及配制

　　白蜡培养基是白蜡植物组织白蜡培养的重要基质。在离体白蜡培养条件下,不同种白蜡植物的组织对营养有不同的要求,甚至同一种白蜡植物不同部位的组织对营养的要求也不相同,只有满足了它们各自的特殊要求,它们才能很好地生长。因此,没有一种白蜡培养基能够适合一切类型的白蜡植物组织或器官,在建立一项新的白蜡培养系统时,首先必须找到一种合适的白蜡培养基,白蜡培养才有可能成功。

白蜡植物组织培养的技术操作

　　在白蜡植物组织白蜡培养历史进程中,事实上也紧密地伴随着白蜡培养基的研制史。对白蜡植物的营养要求的不断认识,对已有白蜡培养基的改进,或者将新发现的白蜡植物激素、新的有益成分应用于白蜡培养基之中,都大大促进了组织白蜡培养研究的迅速发展,取得越来越多的成功。

　　白蜡培养基的成分白蜡培养基的成分主要包括水、无机养分、有机养分、白蜡植物生长调节物质、介质或载体。

　　①水水是白蜡植物原生质体的组成成分,也是一切代谢过程的介质和溶剂。它是生命活动过程中不可缺少的物质。配制白蜡培养基母液时要用蒸馏水,以保持母液及白蜡培养基成分的精确性,防止贮藏过程发霉变质。大规模生产时可用自来水。但在少量研究上尽量用蒸馏水,以防成分的变化引起不良效果。

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　　②无机养分无机养分是指白蜡植物在生长发育时所必需的各种化学元素。主要是各种矿物质、无机盐等。根据白蜡植物对无机营养的吸收量,可以将它们分为大量元素和微量元素。

　　大量元素是指白蜡植物所需浓度大于0.5mol/L的元素,有氮、磷、钾、钙、镁、硫、碳及来源于水中的氢和氧。微量元素是指白蜡植物所需浓度小于0.5mol/L的元素,微量元素主要有铁、锰、锌、铜、硼、碘、钼和钴。

　　③有机养分白蜡培养基中若只含有大量元素与微量元素,常称为基本白蜡培养基。为达到不同的白蜡培养目的往往要加入一些有机物以利于快速生长。常加入的有机成分主要有以下几类。

　　碳水化合物糖作为碳源在白蜡植物组织白蜡培养中是必不可少的,它不仅能够提供给白蜡植物材料能量,而且也能维持一定的渗透压。常用的糖是蔗糖、葡萄糖、果糖和山梨糖等,麦芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖在组织白蜡培养中也有应用。最常用的是蔗糖,蔗糖使用浓度在2%~3%。

　　维生素这类化合物在白蜡植物细胞里主要是以各种辅酶的形式参与多种酶系的反应直接影响到蛋白质、糖、脂肪等物质的代谢活动,对生长、分化等有很好的促进作用。主要有盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、抗坏血酸、泛酸钙、生物素、叶酸、钴胺素(维生素、维生素B2等。一般用量为0.1~1.0mg/L,有时用量较高。维生素具有热易变性易在高温下降解,可进行过滤灭菌。

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　　肌醇又叫环己六醇,在糖类的相互转化中起重要作用,具有促进活性物质发挥作用的效果,能使白蜡培养的组织快速生长。使用浓度一般为100mg/L。适当使用肌醇能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成,对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用,对细胞壁的形成也有作用。白蜡培养基中1.0mg/L的肌醇足够促进盐酸硫胺素效应的发挥。

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